21 Aralık 1948'de Washington, D.C.'de doğan ve annesi tarafından Chattanooga, Tennessee'de büyütülen Samuel Leroy Jackson, gençliğinde kekemelikle mücadele etmiş ve bu sorunun üstesinden gelmek için oyunculuk sanatına yönelmiştir. Atlanta'daki Morehouse College'da Deniz Biyolojisi okurken Drama bölümüne geçiş yapan Jackson, 1960'ların sonunda sivil haklar hareketinde aktif rol almıştır. 1972'de mezun olduktan sonra New York'a yerleşerek tiyatro sahnelerinde kariyerine adım atmıştır.
Kariyerinin ilk yıllarında "Zengin ve İnanılmaz" (Coming to America) gibi yapımlarda dikkat çekici olmayan roller üstlenmiştir. Yönetmen Spike Lee ile kurduğu güçlü bağ, kariyerinde bir dönüm noktası olmuş; "She's Gotta Have It" (1986), "Do the Right Thing" (1989), "Mo' Better Blues" (1990) ve özellikle "Orman Ateşi" (Jungle Fever) (1991) filmlerindeki performansları büyük beğeni toplamıştır. "Orman Ateşi"nde canlandırdığı uyuşturucu bağımlısı "Gator" karakteri, o denli etkileyici bulunmuştur ki, Cannes Film Festivali jürisi, Jackson'ı onurlandırmak amacıyla özel olarak "En İyi Yardımcı Erkek Oyuncu" ödülünü ihdas etmiştir.
1990'lar, Samuel L. Jackson'ın küresel bir fenomene dönüştüğü yıllar olmuştur. "Patriot Games" (1992) ve "Jurassic Park" (1993) gibi gişe rekortmeni filmlerde rol aldıktan sonra, 1994 yılında Quentin Tarantino'nun başyapıtı "Ucuz Roman" (Pulp Fiction) filmindeki felsefi tetikçi Jules Winnfield rolüyle sinema tarihine adını altın harflerle yazdırmıştır. Bu unutulmaz performansıyla En İyi Yardımcı Erkek Oyuncu dalında Oscar adaylığı ve BAFTA ödülü kazanmış, Hollywood'daki yerini sağlamlaştırmıştır. Tarantino ile "Jackie Brown" (1997), "Django Unchained" (2012), "The Hateful Eight" (2015) gibi daha birçok projede tekrar bir araya gelmiştir.
Aksiyon ve gerilim türündeki "Ölüm Kadar Sert: Ölümün Kıyısında" (Die Hard with a Vengeance) (1995), "A Time to Kill" (1996), "Müzakereci" (The Negotiator) (1998) ve "Derin Sular" (Deep Blue Sea) (1999) gibi filmlerdeki başrolleriyle gişe başarısını perçinlemiştir. 1999'da George Lucas'ın "Star Wars" serisinin öncül üçlemesinde ("Gizli Tehlike", "Klonların Saldırısı", "Sith'in İntikamı") bilge Jedi Ustası Mace Windu karakterini canlandırarak yeni nesil hayranlar edinmiştir.
2000'li yıllarda kariyerine M. Night Shyamalan'ın "Ölümsüz" (Unbreakable) (2000) ve "Glass" (2019) filmlerindeki Elijah Price (Mr. Glass) rolüyle derinlik katmıştır. Ancak şüphesiz en akılda kalıcı rollerinden biri, 2008 yapımı "Iron Man" filminin sonunda kısa bir görünümle başladığı ve Marvel Sinematik Evreni'nin (MCU) ayrılmaz bir parçası haline gelen S.H.I.E.L.D. Direktörü Nick Fury rolüdür. Bu ikonik rolle "The Avengers" (2012) başta olmak üzere sayısız filmde ve "Secret Invasion" (2023) gibi dizilerde izleyiciyle buluşmuştur.
Sinema tarihinin en üretken ve gişe başarısı en yüksek aktörlerinden biri olan Samuel L. Jackson, kendine has karizması, etkileyici sahne varlığı ve "cool" tavrıyla kuşaklar boyunca izleyicilerin kalbinde taht kurmuştur. 2022 yılında, sinema dünyasına sunduğu olağanüstü katkılarından dolayı Akademi Onur Ödülü'ne (Onursal Oscar) layık görülmüştür.